琼脂糖凝胶电泳条带不清晰(琼脂糖凝胶电泳条带分析)
哈喽,大家好~~~我是小编田甜,关于琼脂糖凝胶电泳条带不清晰,琼脂糖凝胶电泳条带分析这个很多人还不知道,那么现在让田甜带着大家一起来看看吧!
条带分开的程度看你实验的需求。
如果你的Marker相邻两个条带相差100bp,而你的样本阳性结果和多带一个内含子的假阳性结果只差50bp(比方说你在做反转录PCR实验)那你当然需要分清楚一些。
否则的话只要看得清楚你的样本条带是位于那两个Marker条带之间就可以了。
想要分开些跟胶厚度,点样都没有关系。
提高琼脂糖浓度确实有影响,但不是一个线性的关系,琼脂糖浓度决定哪个大小范围的分得最开,不是所有条带都相同程度的分开,唉,看摆渡百科吧“ 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb 的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
”选定琼脂糖浓度的情况下,跑得时间越久分得越开。
在电泳开始时使用低压有利于条带清晰,是因为点样之后样品内分子是胡乱排列的,加上电压之后才统一方向排列好。
所以一小段时间的低压让它们都排列好,再转高压能够同时起跑。
不然的话好比起跑线上有些人背对着终点站有些人面对有人侧对,结果一声枪响,本来同样速度的人跑出不同的结果来--同样大小的分子跑出来不在严格一条线,条带当然不完美咯。
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~哇,不好意思跟蛋白质电泳搞混了。
其实一般不用放低压啦,尤其你才跑30分钟。
不过你的电压比我高很多。
我一般是100V跑45分钟,但是电压跟胶的大小有关啦。
只要跑出来结果没问题,就不要随意改动实验条件了。
本文分享完毕,希望对大家有所帮助哦。
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